材料與方法
電熱鼓風干燥箱(DHG-9075A)、電熱恒溫水浴鍋 (HWS-24):上海一恒科學儀器有限公司;電子天平 (AUX320):日本島津公司;超聲波清洗器(KQ-500V): 昆山市超聲儀器有限公司;低速離心機(TD-6):長沙 湘智離心機儀器有限公司;循環水式真空泵[SHZ-D (Ⅲ)]、旋轉蒸發儀(YRE-5299):鞏義市予華儀器有限責任公司;恒溫培養振蕩器(HNY-200B):天津市歐諾 儀器儀表有限公司。采用 FRAP 法按照 T-AOC 試劑盒說明書檢測總抗 氧化能力,分別取濃度為 0.15、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5 mmol/L 的FeSO·4 7H2O 標準溶液 5 μL,各加入 180 μL FRAP 工 作液,混勻后 37 ℃孵育 4 min,測定其 OD593 nm。以 FeSO4 濃度(μmol/L)為橫坐標,OD593 nm 為縱坐標,繪制 FRAP 測定標準曲線[18]。根據測得的楊桃多酚提取液質量濃 度,將其稀釋為 10、20、30、40、50、60 μg/mL,同時以等 濃度的抗壞血酸作陽性對照。用移液器取 5 μL 溶液, 加入 FRAP 工作液 180 μL,混勻后 37 ℃孵育 4 min,測 定其 OD593 nm。
結果與分析
采用沒食子酸作為總多酚測定的標 準物質時,其在 765 nm 處的吸光度 OD765 nm 與其濃度 呈良好的線性關系。測定楊桃多酚提取液的吸光度 值,根據以上沒食子酸標準曲線的回歸方程,可得楊 桃多酚提取液的濃度為 5.2 mg/mL。后續總抗氧化能 力、羥自由基清除能力及 DPPH 自由基清除能力試驗 中所使用的楊桃多酚提取液均是以此濃度楊桃多酚 提取液稀釋一定倍數得到的溶液。當體積為 1.5 mL 時抗壞血酸對羥自由基的清除率達 99%以上,羥自由 基基本已被清除。在研究的體積范圍內,隨著楊桃多 酚提取液體積的增加,羥自由基清除率逐漸增加,最 高可達 90%以上,說明楊桃多酚提取液有良好的自由 基清除能力。此外,同一質量濃度條件下,楊桃多酚提 取液清除羥自由基的能力均低于相同濃度的抗壞血 酸溶液。